重組試劑（rCR、rFC）是解決 LER 的重要工具，優(yōu)化內(nèi)毒素檢測性能。重組鱟試劑（rCR）通過基因工程表達 C、B 因子及凝固酶原，剔除 G 因子，完全模擬天然鱟級聯(lián)反應(yīng)，靈敏度達 0.005EU/mL，與天然方法橋接容易，能避免 LPS 結(jié)構(gòu)變化導(dǎo)致的假陰性；重組 C 因子（rFC）靈敏度 0.005-5EU/mL，性狀穩(wěn)定、均一性好，雖需熒光酶標(biāo)儀，但對部分 LER 場景（如無蛋白質(zhì)干擾）適配性強。二者擺脫了天然鱟試劑的局限，為內(nèi)毒素檢測提供更抗 LER 的選擇，契合行業(yè)技術(shù)趨勢。 開展細菌內(nèi)毒素檢測的操作過程，需防止樣品受到外源性污染。上海非動物源內(nèi)毒素檢測LER現(xiàn)象

樣品中存在的非特異性鱟反應(yīng)啟動物，會繞過內(nèi)毒素直接觸發(fā)鱟試劑反應(yīng)，導(dǎo)致內(nèi)毒素檢測出現(xiàn)假陽性，需針對性消除干擾。常見的非特異性啟動物包括 1,3-β-D 葡聚糖和含絲氨酸蛋白酶的生物制品（如胰酶）：1,3-β-D 葡聚糖會啟動鱟試劑的 G 因子旁路，不依賴內(nèi)毒素即可引發(fā)凝膠形成或光度變化；胰酶等絲氨酸蛋白酶類物質(zhì)，其作用機制與內(nèi)毒素觸發(fā)鱟試劑的過程相似，會模擬內(nèi)毒素信號導(dǎo)致誤判。針對這類干擾，若樣品含 1,3-β-D 葡聚糖，可使用試劑盒配套的抗增液，通過抑制 G 因子活性阻斷旁路啟動；若樣品為胰酶等生物制品，可通過加熱處理（如 80℃加熱 10 分鐘）滅活絲氨酸蛋白酶，避免其模擬內(nèi)毒素反應(yīng)。這些處理措施能有效排除非特異性信號，確保內(nèi)毒素檢測只針對目標(biāo)內(nèi)毒素產(chǎn)生響應(yīng)，提升結(jié)果準(zhǔn)確性。 北京生物制品內(nèi)毒素檢測常見問題分析細菌內(nèi)毒素試驗（BET）是用鱟變形細胞裂解物（LAL）測內(nèi)毒素的體外方法，LAL 測試獲國際藥典推薦。

內(nèi)毒素檢測重組級聯(lián)試劑（rCR）與天然鱟試劑在原料、性能和可持續(xù)性上存在本質(zhì)區(qū)別。原料方面，天然鱟試劑依賴鱟血采集，受動物資源限制，而 rCR 通過基因工程表達 C、B 因子及凝固酶原，無動物源性，供應(yīng)穩(wěn)定。特異性上，天然鱟試劑因含 G 因子，易與 β-D 葡聚糖反應(yīng)產(chǎn)生假陽性，而 rCR 剔除 G 因子，只對內(nèi)毒素特異性響應(yīng)，從機制上消除干擾。批間一致性方面，天然鱟試劑受鱟個體差異影響，批間 CV 值較高；rCR 成分明確且生產(chǎn)工藝標(biāo)準(zhǔn)化，批間差異明顯降低，CV 值≤15%。兩者靈敏度相當(dāng)（0.005EU/mL），但 rCR 無需面臨鱟資源政策限制，更符合動物福利趨勢和長期質(zhì)控需求，是天然鱟試劑的理想替代。

在內(nèi)毒素檢測的技術(shù)體系中，凝膠法與動態(tài)顯色法基于不同原理與特性，形成互補應(yīng)用格局。凝膠法依托鱟試劑與內(nèi)毒素的凝集反應(yīng)，實現(xiàn)定性或半定量檢測，其靈敏度覆蓋 0.03EU/ml、0.06EU/ml 等多梯度，60 分鐘即可完成反應(yīng)；檢測結(jié)果依賴肉眼觀察（180° 倒轉(zhuǎn)判讀凝膠形成），數(shù)據(jù)需手工記錄，配套 內(nèi)毒素凝膠法測定儀（恒溫儀） 即可開展，雖自動化程度有限，但操作簡潔，適用于生產(chǎn)環(huán)節(jié)的快速初篩。與之相比，動態(tài)顯色法通過監(jiān)測反應(yīng)混合物吸光度或透光率的變化（如達預(yù)設(shè)檢測值的反應(yīng)時間、信號增速）實現(xiàn) 定量檢測 ，靈敏度拓展至 5-0.005EU/ml ，60-90 分鐘反應(yīng)時長雖略長，卻可借助酶標(biāo)儀或全自動內(nèi)毒素檢測分析儀完成全流程自動化操作—軟件實時采集數(shù)據(jù)，契合藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（GMP）對數(shù)據(jù)追溯與精度的要求。二者各有側(cè)重：凝膠法以 “快速定性” 服務(wù)基礎(chǔ)防控，動態(tài)顯色法憑 “準(zhǔn)確定量 + 自動化” 支撐嚴苛質(zhì)控，共同為內(nèi)毒素檢測提供靈活適配的技術(shù)路徑。 細菌內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁脂多糖，細菌死亡裂解釋放，微量級即致人體發(fā)熱、休克等威脅。

重組級聯(lián)試劑作為內(nèi)毒素檢測鱟試劑的理想替代方案，其具備的優(yōu)勢有：①優(yōu)化的G因子級聯(lián)反應(yīng)，無G因子旁路干擾。采用基因重組技術(shù)表達鱟血細胞中的C因子（Factor C）、B因子（Factor B）和凝固酶原（Proclotting enzyme），無G因子旁路干擾，排除1，3-β-D葡聚糖假陽性風(fēng)險。②依然采用動態(tài)顯色法原理，可沿用天然鱟試劑檢測設(shè)備。重組級聯(lián)試劑（rCR）,與天然鱟（動態(tài)顯色法）具有相同的操作流程、檢測設(shè)備、分析方法，用戶可以沿用天然鱟的儀器、軟件、耗材、人員培訓(xùn)、驗收程序等，無需投入額外成本。③具有與天然鱟的相同反應(yīng)機制，檢測結(jié)果具有等效性。完全模擬了天然鱟試劑的酶聯(lián)反應(yīng)，由3種蛋白組成的級聯(lián)反應(yīng)機制提供了信號放大的過程，確保了檢測的準(zhǔn)確性和靈敏度。湖州申科按照藥典要求進行替代方法驗證，無縫銜接技術(shù)轉(zhuǎn)移，助力用戶從方法驗證到工藝落地，從數(shù)據(jù)合規(guī)到全球申報。 內(nèi)毒素檢測的方法多樣性、多影響因素及實驗干擾，會導(dǎo)致自檢數(shù)據(jù)與廠家數(shù)據(jù)存在差異。江蘇細菌內(nèi)毒素檢測風(fēng)險評估

動態(tài)顯色法鱟試劑監(jiān)測吸光度變化定量內(nèi)毒素，抗干擾強，適配復(fù)雜基質(zhì)樣品檢測。上海非動物源內(nèi)毒素檢測LER現(xiàn)象

在進行內(nèi)毒素檢測時，干擾試驗又叫增強或抑制試驗，主要目的是確證檢測內(nèi)毒素的方法是否受樣品干擾。在建立細菌內(nèi)毒素檢查方法中，驗證試驗前，要去除樣品可能含有的內(nèi)毒素，以確保建立方法的準(zhǔn)確可靠。藥典規(guī)定：①當(dāng)進行新藥的內(nèi)毒素檢查試驗前，或無內(nèi)毒素檢查項品種建立內(nèi)毒素檢查法時，需進行干擾試驗；②當(dāng)鱟試劑、供試品的配方、生產(chǎn)工藝改變，或試驗環(huán)境下發(fā)生了任何有可能影響試驗結(jié)果的變化時，需重新進行干擾試驗。生產(chǎn)廠家常發(fā)生的一些微小變更，會影響到評估結(jié)果，進而影響到供試品對鱟試劑的干擾試驗。因此，生產(chǎn)廠家應(yīng)制定一個重復(fù)進行干擾試驗的周期，并進行跟蹤和記錄。 上海非動物源內(nèi)毒素檢測LER現(xiàn)象