在為新物料或新產(chǎn)品、中間產(chǎn)品建立細菌內毒素檢測方法時，常會遇到各種困難，尤其是尚處于新藥研發(fā)早期階段的藥物。此時，由于藥物制劑、緩沖系統(tǒng)等還不穩(wěn)定，經(jīng)常會發(fā)生變化，這樣就給方法的建立帶來了不同程度的影響。在建立細菌內毒素檢查法之前，須盡可能多地了解有關該藥品的基本信息，例如：有關樣品的可溶性信息、推薦的稀釋液、在水中的溶解度以及合適溶劑，樣品的pH范圍，分子量大小；如果是蛋白產(chǎn)品，還要了解該產(chǎn)品的等電點，產(chǎn)品規(guī)格、體積或重量，擬用于臨床的用法和用量等，以便選擇合適的樣品處理方法和內毒素檢測方法。 細菌內毒素檢查用水需符合滅菌注射用水標準，內毒素含量有明確限值且無干擾。江蘇疫苗內毒素檢測技術升級

針對單核細胞活化反應測定法（MAT）通過檢測內毒素的生物活性，有效規(guī)避低內毒素回收（LER）對內毒素檢測的影響。其原理是：熱原（包括被掩蔽的 LPS）活化單核細胞表面的 TLR 受體，釋放 IL-6 等細胞因子，通過 ELISA 檢測 IL-6 濃度，結合標準曲線推算熱原含量。即使 LPS 因 LER 改變超分子結構，只要仍具生物活性，就能被 MAT 法識別。這種 “檢測活性而非結構” 的特性，使 MAT 法成為 LER 場景下內毒素檢測的重要補充，與其他方法協(xié)同構建高效可靠的熱原防控體系。 北京疫苗內毒素檢測商業(yè)化試劑盒內毒素檢測需關注制劑成分，螯合劑和表面活性劑可能誘發(fā)“低內毒素回收（LER）”。

低內毒素回收（LER）又稱內毒素掩蔽，是指無菌制劑（尤其蛋白類生物制劑）進行內毒素檢測時，加標內毒素的回收率＜50% 的現(xiàn)象，且無法通過稀釋排除，區(qū)別于傳統(tǒng)檢測干擾。LER 會導致內毒素污染被低估，已被全球監(jiān)管機構重點關注：FDA 2013 年要求生物藥 BLA 申報時提交 LER 研究報告；EMA 2023 年明確含表面活性劑（如吐溫）或螯合劑（如 EDTA）的制劑需提供 LER 數(shù)據(jù)；中國藥典 2025 版 9251 通則也新增 LER 內容，與國際接軌。這些要求促使企業(yè)優(yōu)化內毒素檢測流程，避免因 LER 導致的檢測偏差，確保藥品**。

當實驗室更換內毒素檢測方法或更換試劑供應商時，需進行方法比對與橋接驗證。比對實驗需選取至少 3批代表性樣品，分別用新舊方法檢測，計算結果相關性（如相關系數(shù) R?≥0.95）和偏差（≤20%）。橋接驗證還需評估新方法的特異性、靈敏度是否與舊方法一致，如確認對高風險樣品（如含 β- 葡聚糖的樣品）的抗干擾能力相當。若方法變更涉及法規(guī)申報產(chǎn)品，需將驗證數(shù)據(jù)納入申報資料，證明變更后方法仍能有效控制內毒素風險，符合 FDA、NMPA 等監(jiān)管機構對方法變更的合規(guī)性要求。 細菌內毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁脂多糖，細菌死亡裂解釋放，微量級即致人體發(fā)熱、休克等威脅。

內毒素檢測常與熱原檢測混淆，二者既有關聯(lián)又有區(qū)別：熱原是指所有能引起發(fā)熱的物質（包括內毒素、病毒、真菌等），通過傳統(tǒng)家兔熱原試驗檢測；內毒素是熱原的主要成分（占 90% 以上），檢測更具特異性。目前，家兔熱原試驗因操作復雜、動物成本高，已逐漸被單核細胞活化反應測定法（MAT）替代，但部分產(chǎn)品（如放射性質藥物、血液制品）仍需保留家兔試驗作為補充。法規(guī)要求內毒素檢測結果需與熱原風險關聯(lián)，若內毒素檢測合格但臨床出現(xiàn)熱原反應，需排查是否存在非內毒素類熱原，通過聯(lián)合檢測確保產(chǎn)品**性。 塑料器皿對內毒素吸附力強，制備內毒素工作標準品（CSE）稀釋液建議用硼硅酸鹽玻璃管。江蘇疫苗內毒素檢測技術升級

外源性熱原含細菌內毒素、脂磷壁酸、酵母多糖等，單核細胞活化反應檢查法可檢出全部熱原。江蘇疫苗內毒素檢測技術升級

湖州申科生物重組級聯(lián)試劑（rCR）采用基因工程技術合成，完全模擬了天然鱟試劑中的酶促級聯(lián)放大反應。重組鱟試劑反應體系中包含重組C因子、重組B因子和重組凝固酶原。當供試品中存在內毒素，重組C因子識別內毒素后活化，會依次級聯(lián)活化下游重組B因子和重組凝固酶原。凝固酶原轉化為具有生物活性的凝固酶后，識別并催化下游帶顯色基團的底物產(chǎn)生顯色反應。顯色反應的強度和內毒素濃度成正相關，從而定量檢測內毒素。本產(chǎn)品用于定量測定人用和動物用注射藥物、生物制品及**器械等樣品中的細菌內毒素的含量。 江蘇疫苗內毒素檢測技術升級